PCR是生物领域中最基础，也是尤为重要的一环

今天给大家讲述一些

PCR应该了解的知识 与 实验出现问题的解决办法

首先给大家详细介绍下其原理

PCR（Polymerase Chain Reaction）原理：

即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

介绍了原理，少不了得说其几个重要体系成份：

1.模板（Template）：基因组、质粒DNA、cDNA、也可以是细菌、组织样品等。

2.引物（Primer）：确定扩增目的序列打的特异性；确定扩增引物长度。

3.DNA聚合酶（DNA Polymerase）：推动PCR反应进行的机器。

4.缓冲液（Buffer）：控制体系的pH和离子，为DNA聚合酶提供最佳工作环境。

5.脱氧核苷酸（dNTP）:DNA的基本组成元件，包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP。

6.Mg、K离子增强剂。

而我们在PCR实际操作过程中会遇到很多不可避免的问题，比如说：PCR产物条带拖尾，有杂带，更严重的是除了marker外，啥条带都看不到。

那我们应该如何有效的避免出现这些问题呢？

首先得找出出现这些问题的原因，才能有效解决问题。

常见的问题有很多种，但绝大部分能总结出以下几点。

问题一：完全没有条带

1.确认试剂是否存在质量问题或者加样时出错，导致反应体系不完整。

2.检查模板DNA是否正确或者存在特殊结构，导致模板与引物无法结合。

3.引物或反应温度设计不合理。

问题二：有很多非特异性条带

1.反应体系被污染。

2.引物特异性差。

3.退火温度不合适。

问题三：目的条带弱

1.聚合酶活性过低。

2.循环次数偏低。

3.模板DNA浓度过低。

问题四：PCR产物出现片状拖尾

1.DNA聚合酶过多或酶活性差。

2.dNTP和Mg离子浓度过高。

3.退火温度过低，PCR循环数偏多。

4.模板DNA用量过大或模板DNA不纯。

5.引物特异性差、引物间形成二聚体导致非特异性扩增。

知道了问题的出现原因，就能有效的针对并改变PCR条件，跑出漂亮的条带了。最后祝大家，PCR每次都能成功扩出目的条带。

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/